2, তাক প্লাটিনাম পিসিআর মিক্স
কার্যকলাপ সংজ্ঞা
1 ইউনিট (U) তাক প্ল্যাটিনাম ডিএনএ পলিমারেজ কার্যকলাপকে 10 এনএমওল ডিওক্সিনোক্লিওটাইডসকে অ্যাসিড-দ্রবণীয় পদার্থে 74 ডিগ্রি সেন্টিগ্রেডে 30 মিনিটের মধ্যে সক্রিয় স্যামন শুক্রাণু ডিএনএ টেমপ্লেট/প্রাইমার হিসাবে ব্যবহার করার জন্য প্রয়োজনীয় এনজাইমের পরিমাণ হিসাবে সংজ্ঞায়িত করা হয়।
মান নিয়ন্ত্রণ
SDS-PAGE সনাক্তকরণ দ্বারা বিশুদ্ধতা 99%এর বেশি; এক্সোজেনাস নিউক্লিজের কোনও কার্যকলাপ সনাক্ত করা হয়নি; মানব জিনোমে একক-কপি জিনকে কার্যকরভাবে সম্প্রসারিত করা যেতে পারে; এক সপ্তাহের জন্য ঘরের তাপমাত্রায় সংরক্ষণ করার সময় কোনও উল্লেখযোগ্য কার্যকলাপ পরিবর্তন হয় না।
প্রধান প্রযুক্তিগত পরামিতি
এটিতে 5′-3 ′ এক্সোনুক্লিজ ক্রিয়াকলাপ এবং 3′-5 ′ এক্সোনুক্লিজ ক্রিয়াকলাপ রয়েছে এবং এর বিশ্বস্ততা পিএফইউ পলিমারেজের পাশে রয়েছে। তাক প্ল্যাটিনাম পলিমারেজের এক্সটেনশনের গতি পিএফইউ পলিমারেজের চেয়ে দ্রুত এবং পরিবর্ধনের দক্ষতা বেশি। পিসিআর পণ্যগুলি সরাসরি ভোঁতা প্রান্তে বা টিএ ভেক্টর দিয়ে ক্লোন করা যেতে পারে। যদি ক্লোনিং দক্ষতা উন্নত করতে হয়, তাহলে প্রথমে টিএ ভেক্টরে ক্লোনিং করার আগে প্রথমে শুদ্ধ করা এবং 3'-dA ওভারহ্যাং যোগ করার সুপারিশ করা হয়।
ওয়ান-টিউব তাক প্ল্যাটিনাম মাস্টারমিক্স (ন্যাশনাল হাই-টেক প্রোডাক্ট সার্টিফিকেশন)
Q তাক প্ল্যাটিনাম মাস্টারমিক্স পিসিআর প্রতিক্রিয়ার সুনির্দিষ্টতা এবং সংবেদনশীলতা উন্নত করেছে এবং উচ্চ জিসি সামগ্রী, গৌণ কাঠামো এবং এর মতো জটিল টেমপ্লেটগুলিকে বাড়িয়ে তুলতে পারে। টার্গেট টেমপ্লেটের 2 কপি যত কম করা যেতে পারে, আরও নির্ভুল পরীক্ষামূলক ফলাফল নিশ্চিত করা যায়।
■ অনন্য তাক প্ল্যাটিনাম মাস্টারমিক্স ফর্মুলা পুরো প্রতিক্রিয়া ব্যবস্থাকে খুব স্থিতিশীল করে তোলে এবং 4 ডিগ্রি সেন্টিগ্রেড তাপমাত্রায় বারবার ফ্রিজ-থাও বা দীর্ঘমেয়াদী স্টোরেজ দ্বারা কার্যকলাপ প্রভাবিত হবে না।
Stable স্থিতিশীল এবং দক্ষ পূর্ব-প্রস্তুত পিসিআর মিশ্র সমাধান অপারেশনকে দ্রুত এবং সহজ করে তুলতে পারে, শ্রমের তীব্রতা এবং নমুনা ত্রুটি ব্যাপকভাবে হ্রাস করে। উচ্চ-কর্মক্ষমতা পিসিআর বর্ধক এবং অপটিমাইজার এছাড়াও মিশ্রণে অন্তর্ভুক্ত করা হয়, যা পিসিআর অবস্থার প্রয়োজনীয়তা হ্রাস করে।
Product এই প্রোডাক্টে ডাই-ধারণকারী এবং ডাই-ফ্রি সিস্টেম উভয়ই রয়েছে। ডাই-ধারণকারী মাস্টারমিক্স পণ্যগুলি পিসিআর-এর পরে সরাসরি ইলেক্ট্রোফোরেস করা যায়, লোডিং বাফার যোগ না করে।
অ্যাপ্লিকেশন
এটি জিনোমের মতো জটিল টেমপ্লেটগুলি থেকে উচ্চ বিশ্বস্ততা পণ্যগুলি বাড়ানোর জন্য পিএফইউ পলিমারেজকে প্রতিস্থাপন করতে পারে এবং এটি এক্সপ্রেশন জিনের ক্লোনিং, সাইট-নির্দিষ্ট মিউটেশন এবং একক নিউক্লিওটাইড পলিমর্ফিজম (এসএনপি) ইত্যাদির বিশ্লেষণের জন্য উপযুক্ত।
পিসিআর প্রাইমার ডিজাইন করার ক্ষেত্রে সতর্কতা:
প্রাইমারের দৈর্ঘ্য সাধারণত 20-25 মের। যাইহোক, দীর্ঘ টুকরা PCR করার সময়, প্রাইমারের দৈর্ঘ্য বাড়িয়ে 30-35 মের করা উচিত।
Pri দুটি প্রাইমারের মধ্যে কোন পরিপূরক জুড়ি নেই, বিশেষ করে 3 ′ প্রান্তে শেষ 3 টি ঘাঁটির জন্য।
■ GC বিষয়বস্তু 50-60%হওয়া উচিত এবং স্থানীয় ধনী GC বা AT এড়িয়ে চলুন। প্রাইমার এবং টেমপ্লেটকে দৃably়ভাবে আবদ্ধ করার জন্য, 3 ′ শেষে সমৃদ্ধ কাঠামো এড়িয়ে চলুন।
Secondary সেকেন্ডারি স্ট্রাকচার তৈরির জন্য প্রাইমার এড়িয়ে চলুন।
T টিএম তাপমাত্রা একে অপরের কাছাকাছি দুটি প্রাইমার নির্বাচন করুন
PCR এর জন্য প্রাইমারের টিএম ভ্যালুর গণনা:
■ যখন প্রাইমার 20 মারের কম হয়: Tm = 2 ° C × (A+T)+4 ° C × (G+C)।
■ যখন প্রাইমার 20 মারের বেশি হয়: Tm = 81.5+0.41 × (GC%)-600/L, যেখানে L হল প্রাইমারের দৈর্ঘ্য।
((Tm-5) an C এ অ্যানিলিং তাপমাত্রা সেট করুন।
পিসিআর প্রাইমার ইনপুট
প্রাইমারের উপযুক্ত চূড়ান্ত ঘনত্ব 0.1 μM এবং 1.0 μM এর মধ্যে নির্বাচন করা যেতে পারে। খুব কম প্রাইমার ঘনত্ব পরিবর্ধন পণ্যের কম ফলনের দিকে পরিচালিত করে, যখন খুব বেশি প্রাইমার ঘনত্ব অ-নির্দিষ্ট পরিবর্ধনের প্রবণতা বেশি। সাধারণত, যখন টেমপ্লেট ডিএনএর পরিমাণ বড় বা জটিল টেমপ্লেট ডিএনএ (যেমন মানব জিনোম ডিএনএ) টেমপ্লেট হিসাবে ব্যবহৃত হয়, তখন প্রাইমারের ঘনত্ব কম হওয়া উচিত। যখন টেমপ্লেট ডিএনএর পরিমাণ ছোট বা সরল টেমপ্লেট ডিএনএ (যেমন, প্লাজমিড ডিএনএ, ইত্যাদি) টেমপ্লেট হিসাবে ব্যবহৃত হয়, তখন প্রাইমারের ঘনত্ব বেশি হওয়া উচিত।
সমস্ত পণ্য ODM/OEM এর জন্য কাস্টমাইজ করা যায়। বিস্তারিত জানার জন্য,অনুগ্রহ করে কাস্টমাইজড সার্ভিস (ODM/OEM) ক্লিক করুন
  |
জিনোমিক ডিএনএকে টেমপ্লেট হিসাবে ব্যবহার করুন 1 কেবি টুকরো বাড়ানোর জন্য। |
A-1 টেমপ্লেট
■ টেমপ্লেটটিতে প্রোটিন অমেধ্য বা তাক ইনহিবিটারস ইত্যাদি রয়েছে DNA ডিএনএ টেমপ্লেট শুদ্ধ করুন, প্রোটিনের অমেধ্য দূর করুন বা পরিশোধন কিট দিয়ে টেমপ্লেট ডিএনএ বের করুন।
Template টেমপ্লেটের বিকৃতি সম্পূর্ণ হয় না den যথাযথভাবে বিকৃতি তাপমাত্রা বৃদ্ধি করে এবং বিকৃতি সময়কে দীর্ঘায়িত করে।
■ টেমপ্লেট অবনতি the টেমপ্লেটটি পুনরায় প্রস্তুত করুন।
A-2 প্রাইমার
Pri প্রাইমারের দরিদ্র গুণ the প্রাইমার পুনরায় সংশ্লেষিত করুন।
■ প্রাইমার অবনতি —— সংরক্ষণের জন্য উচ্চ ঘনত্বের প্রাইমারগুলিকে ছোট ভলিউমে ভাগ করে নিন। একাধিক হিমায়িত এবং গলা বা দীর্ঘমেয়াদী 4 ° C cryopreserved এড়িয়ে চলুন।
Pri প্রাইমারের অনুপযুক্ত নকশা (যেমন প্রাইমারের দৈর্ঘ্য পর্যাপ্ত নয়, ডাইমার প্রাইমার ইত্যাদির মধ্যে গঠিত)
A-3 Mg2+একাগ্রতা
■ এমজি2+ ঘনত্ব খুব কম - সঠিকভাবে Mg বৃদ্ধি2+ ঘনত্ব: Mg অনুকূল করুন2+ অনুকূল Mg নির্ধারণ করতে 0.5 মিমি ব্যবধানের সাথে 1 মিমি থেকে 3 মিমি পর্যন্ত প্রতিক্রিয়াগুলির একটি সিরিজ দ্বারা ঘনত্ব2+ প্রতিটি টেমপ্লেট এবং প্রাইমারের জন্য ঘনত্ব।
A-4 অ্যানিলিং তাপমাত্রা
An উচ্চ অ্যানিলিং তাপমাত্রা প্রাইমার এবং টেমপ্লেটের বাঁধনকে প্রভাবিত করে। - অ্যানিলিং তাপমাত্রা হ্রাস করুন এবং 2 ডিগ্রি সেন্টিগ্রেডের গ্রেডিয়েন্টের সাথে শর্তটি অনুকূল করুন।
A-5 এক্সটেনশনের সময়
■ সংক্ষিপ্ত এক্সটেনশন সময় extension এক্সটেনশন সময় বাড়ান।
ফেনোমেনা: নেতিবাচক নমুনাগুলি লক্ষ্য ক্রম ব্যান্ডগুলিও দেখায়।
পিসিআর এর A-1 দূষণ
Target টার্গেট সিকোয়েন্স বা পরিবর্ধন পণ্যের ক্রস দূষণ fully নেতিবাচক নমুনায় টার্গেট সিকোয়েন্স সম্বলিত নমুনাটি পাইপ না করা বা সেগুলি সেন্ট্রিফিউজ টিউব থেকে ছিটকে না দেওয়া। বিদ্যমান নিউক্লিক অ্যাসিডগুলি দূর করার জন্য রিএজেন্ট বা সরঞ্জামগুলি অটোক্লেভ করা উচিত এবং নেতিবাচক নিয়ন্ত্রণ পরীক্ষার মাধ্যমে দূষণের অস্তিত্ব নির্ধারণ করা উচিত।
■ রিএজেন্ট দূষণ liএলিয়াক্ট রিএজেন্ট এবং কম তাপমাত্রায় সঞ্চয় করে।
A-2 প্রাইমr
■ এমজি2+ ঘনত্ব খুব কম - সঠিকভাবে Mg বৃদ্ধি2+ ঘনত্ব: Mg অনুকূল করুন2+ অনুকূল Mg নির্ধারণ করতে 0.5 মিমি ব্যবধানের সাথে 1 মিমি থেকে 3 মিমি পর্যন্ত প্রতিক্রিয়াগুলির একটি সিরিজ দ্বারা ঘনত্ব2+ প্রতিটি টেমপ্লেট এবং প্রাইমারের জন্য ঘনত্ব।
■ অনুপযুক্ত প্রাইমার নকশা, এবং লক্ষ্য ক্রম অ-লক্ষ্য ক্রম সঙ্গে সমজাতীয়তা আছে। -প্রাইমারগুলি পুনরায় ডিজাইন করুন।
ফেনোমেনা: PCR পরিবর্ধন ব্যান্ডগুলি প্রত্যাশিত আকারের সাথে অসঙ্গতিপূর্ণ, বড় বা ছোট, অথবা কখনও কখনও নির্দিষ্ট পরিবর্ধন ব্যান্ড এবং অ-নির্দিষ্ট পরিবর্ধন ব্যান্ডগুলি ঘটে।
এ -1 প্রাইমার
Oor দরিদ্র প্রাইমার নির্দিষ্টতা
-পুনরায় ডিজাইন প্রাইমার।
■ প্রাইমার ঘনত্ব খুব বেশী ro সঠিকভাবে বিকৃতি তাপমাত্রা বৃদ্ধি এবং বিকৃতি সময় দীর্ঘায়িত করে।
A-2 Mg2+ একাগ্রতা
Mg এমজি2+ ঘনত্ব খুব বেশি - Mg2+ ঘনত্বকে যথাযথভাবে হ্রাস করুন: Mg অনুকূল করুন2+ অনুকূল Mg নির্ধারণ করতে 0.5 মিমি ব্যবধানের সাথে 1 মিমি থেকে 3 মিমি পর্যন্ত প্রতিক্রিয়াগুলির একটি সিরিজ দ্বারা ঘনত্ব2+ প্রতিটি টেমপ্লেট এবং প্রাইমারের জন্য ঘনত্ব।
A-3 থার্মোস্টেবল পলিমারেজ
En অত্যধিক এনজাইমের পরিমাণ 0.5 0.5 ইউ এর ব্যবধানে এনজাইমের পরিমাণ যথাযথভাবে হ্রাস করুন।
A-4 অ্যানিলিং তাপমাত্রা
An অ্যানিলিং তাপমাত্রা খুব কম rop যথাযথভাবে অ্যানিলিং তাপমাত্রা বৃদ্ধি করুন বা দুই-স্তরের অ্যানিলিং পদ্ধতি অবলম্বন করুন
A-5 PCR চক্র
PC অনেক বেশি পিসিআর চক্র PC পিসিআর চক্রের সংখ্যা হ্রাস করুন।
এ -1 প্রাইমারOor দুর্বল নির্দিষ্টতা the প্রাইমারের পুনরায় ডিজাইন করুন, প্রাইমারের অবস্থান এবং দৈর্ঘ্য পরিবর্তন করুন যাতে এর নির্দিষ্টতা বৃদ্ধি পায়; অথবা নেস্টেড পিসিআর করুন।
A-2 টেমপ্লেট ডিএনএ
টেমপ্লেটটি খাঁটি নয় the টেমপ্লেটটি শুদ্ধ করুন বা পরিশোধন কিট দিয়ে ডিএনএ বের করুন।
A-3 Mg2+ একাগ্রতা
—— এমজি2+ ঘনত্ব খুব বেশি roপ্রতিমভাবে Mg কমানো2+ ঘনত্ব: Mg অনুকূল করুন2+ অনুকূল Mg নির্ধারণ করতে 0.5 মিমি ব্যবধানের সাথে 1 মিমি থেকে 3 মিমি পর্যন্ত প্রতিক্রিয়াগুলির একটি সিরিজ দ্বারা ঘনত্ব2+ প্রতিটি টেমপ্লেট এবং প্রাইমারের জন্য ঘনত্ব।
এ -4 ডিএনটিপি
- ডিএনটিপিগুলির ঘনত্ব খুব বেশি - ডিএনটিপির ঘনত্ব যথাযথভাবে হ্রাস করুন
A-5 অ্যানিলিং তাপমাত্রা
- খুব কম অ্যানিলিং তাপমাত্রা rop যথাযথভাবে অ্যানিলিং তাপমাত্রা বাড়ান
A-6 চক্র
Ooঅনেক চক্র theচক্র সংখ্যাটি অপটিমাইজ করুন
প্রথম ধাপ হল উপযুক্ত পলিমারেজ নির্বাচন করা। নিয়মিত Taq পলিমারেজ 3'-5 'exonuclease কার্যকলাপের অভাবের কারণে প্রুফরিড করতে পারে না, এবং অসঙ্গতি টুকরাগুলির এক্সটেনশন দক্ষতা ব্যাপকভাবে হ্রাস করবে। অতএব, নিয়মিত তাক পলিমারেজ 5 কেবি -র চেয়ে বড় টার্গেট টুকরোগুলোকে কার্যকরভাবে প্রসারিত করতে পারে না। এক্সটেনশন দক্ষতা উন্নত করতে এবং দীর্ঘ টুকরো পরিবর্ধনের চাহিদা পূরণের জন্য বিশেষ পরিবর্তন বা অন্যান্য উচ্চ বিশ্বস্ততা পলিমারেজ সহ তাক পলিমারেজ নির্বাচন করা উচিত। উপরন্তু, লম্বা টুকরোগুলির পরিবর্ধনের জন্যও প্রাইমারের নকশা, বিকৃতি সময়, এক্সটেনশনের সময়, বাফার পিএইচ ইত্যাদি সমন্বয় প্রয়োজন, সাধারণত, 18-24 bp সহ প্রাইমারগুলি ভাল ফলন দিতে পারে। টেমপ্লেট ক্ষতি রোধ করার জন্য, 94 ডিগ্রি সেন্টিগ্রেডে বিকৃতির সময় কমিয়ে 30 সেকেন্ড বা প্রতি চক্র কম করা উচিত, এবং পরিবর্ধনের আগে তাপমাত্রা 94 ডিগ্রি সেলসিয়াসে বাড়ানোর সময় 1 মিনিটেরও কম হওয়া উচিত। তদুপরি, এক্সটেনশনের তাপমাত্রা প্রায় 68 ডিগ্রি সেলসিয়াসে সেট করা এবং 1 কেবি/মিনিটের রেট অনুসারে এক্সটেনশনের সময় ডিজাইন করা দীর্ঘ টুকরোগুলির কার্যকর পরিবর্ধন নিশ্চিত করতে পারে।
উচ্চ বিশ্বস্ততার সাথে বিভিন্ন ডিএনএ পলিমারেজ ব্যবহার করে পিসিআর পরিবর্ধনের ত্রুটির হার হ্রাস করা যেতে পারে। এখন পর্যন্ত পাওয়া সমস্ত তাক ডিএনএ পলিমারেজের মধ্যে, পিএফইউ এনজাইমের সর্বনিম্ন ত্রুটির হার এবং সর্বোচ্চ বিশ্বস্ততা রয়েছে (সংযুক্ত টেবিলটি দেখুন)। এনজাইম নির্বাচন ছাড়াও, গবেষকরা প্রতিক্রিয়া অবস্থার অপ্টিমাইজেশনের মাধ্যমে পিসিআর মিউটেশনের হার আরও কমাতে পারেন, যার মধ্যে রয়েছে বাফার কম্পোজিশন, থার্মোস্টেবল পলিমারেজের ঘনত্ব এবং পিসিআর চক্র সংখ্যা অপ্টিমাইজ করা।
পণ্যের বিভাগ
কেন আমাদের নির্বাচন করেছে
প্রতিষ্ঠার পর থেকে, আমাদের কারখানাটি নীতি অনুসরণ করে প্রথম বিশ্বমানের পণ্য তৈরি করছে
প্রথমে মানের। আমাদের পণ্যগুলি শিল্পে চমৎকার খ্যাতি অর্জন করেছে এবং নতুন এবং পুরাতন গ্রাহকদের মধ্যে মূল্যবান বিশ্বাস।
- টেলিফোন: +86 010-59822688
- বিল্ডিং 5, নং 86, শুয়াংইং ওয়েস্ট রোড, চ্যাংপিং জেলা, বেইজিং।
- people@tiangen.com
